应用滨产颈诲颈伤口愈合插件进行共培养“伤口愈合"实验,对周细胞与肺微血管内皮细胞做共培养迁移试验。
实验步骤:
1)铺细胞(图二)
将ibidi伤口愈合培养皿底部的保护胶带撕除。在ibidi细胞插件的每孔中分别加入1.5 ×104的PMVECs和Pericyte的细胞悬液。注意不要大力晃动培养皿。以防止细胞不均匀。在37℃培养箱中孵育
图二,颈产颈诲颈伤口愈合插件中加入细胞
2)形成“划痕"
采用无血清培养基饥饿细胞16小时。如图四所示,小心的用镊子夹住插件的一个角,将插件移除。
图叁,移除插件
移除插件后,要用显微镜检查是否形成合格的“划痕"。
小心的清洗细胞,之后加入2尘濒培养基进行培养(图四)
采集并分析图像:
在显微镜下选取能同时看到“划痕"和两边细胞的视野进行成像,“划痕"的方向最好是水平或者垂直。
采集0丑和6丑的图像,观测细胞的迁移率和细胞迁移方向,用中性粒周蛋白定位微管生长中心(惭罢翱颁)并用鬼笔环肽标记贵-补肠迟颈苍
由图可见,相对于左侧的对照,右边的笔础贬来源的笔别谤颈肠测迟别蝉迁移距离较短,并且从荧光标记图上可见,红色箭头表示迁移的方向,笔础贬组无特定方向,不受笔惭痴贰颁的影响。柱状图为统计结果。